Marcado No radioactivo de fragmentos del genoma del MRDV-RC (DNAc), para su uso como sonda de hibridación molecular en el diagnóstico del virus
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TextoDetalles de publicación: Córdoba: [s./n.], 1994Descripción: 32 h. + figuras TblsTema(s): Nota de disertación: Tesina (Grado en Ciencias Biológicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales.
Lugar de Trabajo: Instituto de Fisiopatología y Fisiología Vegetal - INTA - 1994 Resumen: El maize rough dwarf virus-Río Cuarto (MRDV-RC) es el agente causal de la enfermedad denominada "Mal de Río Cuarto" que afecta el cultivo de maíz (Zea mays L.) en el área central de Argentina. Posteriormente se detectó en zonas productoras del sur de Brasil y Uruguay. Las pérdidas producidas se calculan aproximadamente en US$ 10.000.000 anuales, lo cual la convierte en la virosis más importante de esta especie.
Es transmitido por Delphacodes kuscheli Fennah (Homóptera, Delphacidae} encontrándose, además, en malezas gramíneas anuales comunes en el cultivo de maíz y en especies de interés agronómico tales como sorgo y trigo.
Las técnicas serológicas son de gran utilidad por su sencillez en la detección de enfermedades pero, la obtención de antisueros de buen título para el virus del "Mal de Río Cuarto" ha tropezado con numerosos obstáculos debido, entre otros aspectos, a la dificultad en la purificación del mismo. La hibridación molecular presenta una interesante alternativa cuando la obtención de reactivos de diagnóstico para serología es dificultosa.
A partir de una genoteca del MRDV-RC, se seleccionaron 2 clones con insertos de tamaño adecuado para ser utilizados como sondas de diagnóstico (800 y HOOpb). Se purificaron y se marcaron con Digoxigenina™. Se evaluó la sensibilidad y especificidad de la técnica comparándola con la técnica de DAS-ELISA.
Se tomó como concentración de uso Hng de sonda por mi de solución de hibridación llegando a detectar 28pg de RNA viral purificado a partir de raíces de maíz y 64fg de DNA homólogo a la sonda. En ningún caso hubo reacción inespecífica con material sano o DNA heterólogo, lo que demuestra la especificidad de la sonda en el diagnóstico del MRDV-RC.
Se observó reacción positiva hasta una dilución de jugo de planta enferma de 1:20480 mientras que por la técnica de DAS-ELISA las mismas muestras reaccionaron en diluciones de hasta 1:40-1:80 por lo que se puede afirmar que la técnica de hibridación molecular es 250 veces más sensible que la de DAS-ELISA. Esta sensibilidad fiae ratificada al evaluar muestras que resultaron sanas por serología; mientras que por hibridación molecular mostraron reacción netamente positiva hasta una dilución de 1:1000.
| Tipo de ítem | Biblioteca actual | Signatura topográfica | Estado | Fecha de vencimiento | Código de barras | |
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Trabajo final de grado
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Biblioteca Luti | SCB 928 - HEMEROTECA (Navegar estantería(Abre debajo)) | Disponible | SCB928 |
Tesina (Grado en Ciencias Biológicas)--Universidad Nacional de Córdoba. Facultad de Ciencias Exactas, Físicas y Naturales.
Lugar de Trabajo: Instituto de Fisiopatología y Fisiología Vegetal - INTA - 1994
El maize rough dwarf virus-Río Cuarto (MRDV-RC) es el agente causal de la enfermedad denominada "Mal de Río Cuarto" que afecta el cultivo de maíz (Zea mays L.) en el área central de Argentina. Posteriormente se detectó en zonas productoras del sur de Brasil y Uruguay. Las pérdidas producidas se calculan aproximadamente en US$ 10.000.000 anuales, lo cual la convierte en la virosis más importante de esta especie.
Es transmitido por Delphacodes kuscheli Fennah (Homóptera, Delphacidae} encontrándose, además, en malezas gramíneas anuales comunes en el cultivo de maíz y en especies de interés agronómico tales como sorgo y trigo.
Las técnicas serológicas son de gran utilidad por su sencillez en la detección de enfermedades pero, la obtención de antisueros de buen título para el virus del "Mal de Río Cuarto" ha tropezado con numerosos obstáculos debido, entre otros aspectos, a la dificultad en la purificación del mismo. La hibridación molecular presenta una interesante alternativa cuando la obtención de reactivos de diagnóstico para serología es dificultosa.
A partir de una genoteca del MRDV-RC, se seleccionaron 2 clones con insertos de tamaño adecuado para ser utilizados como sondas de diagnóstico (800 y HOOpb). Se purificaron y se marcaron con Digoxigenina™. Se evaluó la sensibilidad y especificidad de la técnica comparándola con la técnica de DAS-ELISA.
Se tomó como concentración de uso Hng de sonda por mi de solución de hibridación llegando a detectar 28pg de RNA viral purificado a partir de raíces de maíz y 64fg de DNA homólogo a la sonda. En ningún caso hubo reacción inespecífica con material sano o DNA heterólogo, lo que demuestra la especificidad de la sonda en el diagnóstico del MRDV-RC.
Se observó reacción positiva hasta una dilución de jugo de planta enferma de 1:20480 mientras que por la técnica de DAS-ELISA las mismas muestras reaccionaron en diluciones de hasta 1:40-1:80 por lo que se puede afirmar que la técnica de hibridación molecular es 250 veces más sensible que la de DAS-ELISA. Esta sensibilidad fiae ratificada al evaluar muestras que resultaron sanas por serología; mientras que por hibridación molecular mostraron reacción netamente positiva hasta una dilución de 1:1000.
Texto en español
Abstract en español e inglés
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